經過特定抗原處理過的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞通過細胞融合的方法得到雜交瘤細胞,經HAT培養基篩選、ELISA檢測陽性率后得到陽性克隆株,最后進行細胞培養或將細胞注入到balb/c小鼠腹腔中用腹水培養,收集腹水純化后就能得到單克隆抗體。
小鼠單克隆抗體是最常見最經典的單克隆抗體,經過特定抗原處理過的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞通過細胞融合的方法得到雜交瘤細胞,經HAT培養基篩選、ELISA檢測陽性率后得到陽性克隆株,最后進行細胞培養或將細胞注入到balb/c小鼠腹腔中用腹水培養,收集腹水純化后就能得到單克隆抗體。
鼠單抗制備流程:
1.抗原準備:原核表達蛋白抗原,或者設計合成多肽并偶聯KLH。選擇原核表達蛋白抗原的客戶,可自己提供純化好的抗原(純度>85%),也能為你純化蛋白,從構建原核表達質粒,到獲得純化蛋白。
2.抗原免疫:免疫4只balb/c小鼠,并通過標準程序加強免疫,尾部采血進行ELISA檢測,驗收標準為血清ELISA>10,000。
3.細胞融合和篩選:顯示最佳免疫應答的balb/c小鼠,將其脾細胞和骨髓瘤細胞融合,通過HAT選擇性培養基篩選雜交瘤細胞。
4.雜交瘤細胞篩選:有限稀釋法對雜交瘤細胞進行篩選,對2-5個陽性母細胞進行亞克隆,并選一個亞克隆做亞型鑒定。
5.單克隆抗體大量制備:選擇一個陽性克隆腹腔注射到5只balb/c小鼠進行腹水生產。
6.單克隆抗體純化:使用ProteinA/G純化抗體,并用ELISA檢測抗體效價。
我們的優勢:
1.能夠提供常規的蛋白、多肽抗原的單克隆抗體制備外,我們也擅長小分子抗原的單克隆抗體制備,對于農藥、小分子、重金屬抗原的偶聯和免疫。
2.抗原優質多樣:原核表達的重組蛋白,純度≥95%,濃度可達5mg/mL,可溶性好,模擬天然蛋白狀態。使用專有抗原表位預測軟件篩選設計多肽序列,抗原免疫效果好。
3.專業的抗體篩選和純化技術:有Protein A/G純化抗體技術,也有抗原特異性親和純化技術,任你選擇!
4.從事抗體生產和定制服務,我們專業!我們承諾,單克隆抗體ELISA效價達到1:64,000以上。對于任何宿主、任何蛋白抗原(純度>85%)的單克隆抗體服務保證Western blot檢測結果呈陽性。