目的 明確急性臭氧暴露后大鼠肺泡灌洗液來源的外泌體中微小 RNA(microRNA,miRNA)表達譜 的變化,并分析其與肺損傷的潛在關系。
方法 將成年雄性 Wistar 大鼠放入氣體染毒艙內分別暴露于 0、0. 5 和 2 ppm 臭氧 6 h。 實驗結束后 24 h 麻醉大鼠,收集肺泡灌洗液并提取外泌體。 采用 miRNA-seq 技術檢測外泌體中 差異表達的 miRNA,使用 miRDB 數據庫對組間差異表達 Top 10 miRNA 進行靶基因預測,并對靶基因進行 Gene Ontology 功能富集和 KEGG Pathway 分析。 利用 qRT-PCR 方法對表達豐度較高且組內均一性較好的差異表達 miRNA 進行驗證。
結果 與 0 ppm 組相比,0. 5 ppm 組大鼠肺泡灌洗液中外泌體 miRNA 有 8 個上調、55 個下調,而 2 ppm 組中有 32 個上調、61 個下調。 與 0. 5 ppm 組相比,2 ppm 組大鼠肺泡灌洗液中外泌體 miRNA 有 90 個上調、 74 個下調。 差異表達 Top 10 miRNA 的靶基因主要參與調控 DNA 結合、雜環化合物結合和影響轉錄等方面,并與 癌癥、MAPK、PIK3-AKT、TNF、ErbB、線粒體自噬和 FoxO 等信號通路密切相關。 qRT-PCR 結果表明測序結果基本可 靠。
結論 急性臭氧暴露可導致大鼠肺泡灌洗液中外泌體 miRNA 表達譜發生變化,差異 miRNA 可能參與了臭氧 暴露所致的肺組織炎癥、肺損傷等病理進程。
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