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實(shí)驗(yàn)動物麻醉指南

動物實(shí)驗(yàn)中, 有效的麻醉不僅是保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行方法學(xué)上的關(guān)鍵環(huán)節(jié), 也是保證實(shí)驗(yàn)動物福利的一項(xiàng)基本要求。

如何根據(jù)科研目的采用合適的實(shí)驗(yàn)動物并選擇恰當(dāng)?shù)穆樽硭幬锸琼樌M(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)的重要前提。理想的麻醉應(yīng)該既要保證實(shí)驗(yàn)操作順利進(jìn)行, 保證獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠, 又要將實(shí)驗(yàn)動物遭受的痛苦降至最低, 保證動物福利要求。

根據(jù)麻醉范圍主要分為全身麻醉和局部麻醉,全身麻醉又分為吸入麻醉和非吸入麻醉。

1. 全身麻醉:實(shí)驗(yàn)動物一般較難合作,因此,實(shí)驗(yàn)中常采用全身麻醉。

吸入麻醉:又稱為氣麻,將揮發(fā)性或氣體麻醉劑,由動物呼吸道吸入體內(nèi)而產(chǎn)生麻醉效果。

非吸入麻醉:即注射麻醉,包括肌肉、腹腔、靜脈注射。

2. 局部麻醉:指通過麻醉藥阻斷機(jī)體某一部分的感覺神經(jīng)傳導(dǎo)功能,而運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)保持完好或同時有程度不等的被阻滯狀態(tài)。

吸入式麻醉

麻醉藥以蒸氣或氣體狀態(tài)經(jīng)呼吸道吸入而產(chǎn)生麻醉者,稱吸入麻醉。吸入法對多數(shù)動物有良好的麻醉效果,其優(yōu)點(diǎn)是易于調(diào)節(jié)麻醉的深度和較快的終止麻醉,缺點(diǎn)是中、小型動物較適用,對大型動物如狗的吸入麻醉操作復(fù)雜,通常不用。

常用的吸入性麻醉劑有:異氟醚 Isoflurane、七氟烷 Sevoflurane、氟烷 Halothane

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注射式麻醉

注射麻醉是使用非揮發(fā)性全身麻醉藥進(jìn)行麻醉的方法。大小鼠實(shí)驗(yàn)中常用苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、水合氯醛和氯胺酮等麻醉劑,這些麻醉劑使用方便,一次給藥可維持較長的麻醉時間,麻醉過程較平衡,動物無明顯掙扎現(xiàn)象,但缺點(diǎn)是蘇醒較慢。

一般采用靜脈注射、腹腔注射、肌內(nèi)注射等方法進(jìn)行麻醉。兔、貓、犬、豬等大動物常采用靜脈注射、肌內(nèi)注射的方法進(jìn)行麻醉;小鼠、大鼠、豚鼠等小動物常采用腹腔注射(注射部位宜選在腹部后1/3處略靠外側(cè),避開肝和膀胱)的方法。

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注意事項(xiàng):

(1)靜脈注射必須緩慢,同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應(yīng),當(dāng)這些活動明顯減弱或消失時,立即停止注射。配制的藥液濃度要適中,不可過高,以免麻醉過急;但也不能過低,以減少注入溶液的體積。

(2)在使用麻醉藥過程中,隨時注意觀察動物的反應(yīng),尤其是采用靜脈注射時,絕不可將按體重計(jì)算出的用量匆忙進(jìn)行注射。

(3)腹腔注射最主要的就是要針頭進(jìn)入動物腹腔后,一定要注意回抽,否則極易將麻藥打到動物的胃腸道,引起胃腸道麻痹脹氣,動物常因此無法進(jìn)入麻醉狀態(tài),甚至死亡。

靜脈注射一般采用鼠尾靜脈或兔耳緣靜脈注射。正確找到注射的靜脈是很關(guān)鍵的。其次就是,當(dāng)采用體重計(jì)算麻藥用量后,切不可匆忙注射,靜脈注射必須緩慢進(jìn)行,一定要邊注射邊觀察動物的反應(yīng),如肌肉緊張度、角膜反應(yīng)、抓捏反應(yīng)等。

小鼠麻醉后務(wù)必進(jìn)行麻醉深度的確認(rèn)。若麻醉深度不夠則須延后實(shí)驗(yàn),.待達(dá)到麻醉深度后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn);或者考慮增加劑量使其達(dá)到麻醉深度。

麻醉由淺入深一般可以分為4個階段:

      誘導(dǎo)期:仍有主動動作,呼吸與心率增加,運(yùn)動時步態(tài)不穩(wěn)、后半身搖晃,后肢無力。

淺外科期:停止運(yùn)動后呈側(cè)臥狀,置于仰臥后不能翻正。對非疼痛刺激物肢體動作反應(yīng),捏夾皮膚或刺激腳趾仍有收縮反射,呼吸規(guī)則以胸式呼吸為主,出現(xiàn)中等程度的肌肉松弛,眼瞼和角膜反射存在。

深外科期:呼吸頻率下降,呼吸規(guī)則以腹式呼吸為主,肌肉完全松弛,眼瞼反射消失、角膜反射微弱,對嚴(yán)重刺激都不引起有害反射。

脫離深外科期:四肢持續(xù)震顫、抽搐,全身肌肉開始收縮,由平坦仰臥狀轉(zhuǎn)為側(cè)臥蜷縮狀。

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簡單確認(rèn)麻醉深度的方式:

        皮膚捏夾反應(yīng):用有齒鑷捏夾小鼠皮膚

        刺激腳趾反應(yīng):刺激小鼠腳趾或腳掌部位。

觀察小鼠是否有反應(yīng),若小鼠反應(yīng)靈敏則說明麻醉過淺

局部麻醉

局部麻醉是用局部麻醉藥阻滯周圍神經(jīng)末梢或神經(jīng)干、神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)叢的沖動傳導(dǎo),產(chǎn)生局限性麻醉區(qū)。局部麻醉的特點(diǎn)是動物可保持清醒狀態(tài),對重要器官功能干擾輕微,麻醉并發(fā)癥少,是一種比較安全的麻醉方法。

目前常用的局部麻醉劑有普魯卡因、利多卡因和丁卡因。

如下為這三類的比較:

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局部麻醉常用的方法是表面麻醉、浸潤麻醉、區(qū)域阻滯麻醉及傳導(dǎo)麻醉等。

表面麻醉:將穿透力強(qiáng)的局部麻醉藥直接作用于黏膜表面,使黏膜下神經(jīng)末梢麻醉。可將藥物配成不同濃度的溶液、凝膠和糊劑,通過滴入、噴霧、涂布和灌注等方法將其應(yīng)用到眼、口腔、鼻腔、喉、外耳道或尿道等黏膜處,產(chǎn)生麻醉。

浸潤麻醉和區(qū)域阻滯麻醉:沿手術(shù)切口線逐層注射局部麻醉藥或手術(shù)區(qū)周圍部位注射藥物,阻滯神經(jīng)纖維而達(dá)到麻醉作用,前者稱為浸潤麻醉,后者稱為區(qū)域麻醉。適用于犬、貓皮膚撕裂窗縫合、皮膚疣及皮膚腫瘤的切除、幼犬截尾術(shù)和皮膚活組織的采集等。

【注】:局麻一般采用浸潤麻醉方法,操作時,動物固定好后,首先在局部皮膚用皮頭針先作皮內(nèi)注射,形成橘皮樣丘疹,然后換成局部麻醉長針頭,由皮點(diǎn)進(jìn)針,放射到皮點(diǎn)周圍繼續(xù)注射,直到要求麻醉區(qū)域的皮膚都浸潤為止;可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作要求的深度按照皮下、筋膜、肌肉、腹膜或骨膜的順序,依次注射麻藥,以達(dá)到麻醉神經(jīng)末梢的目的。

局部麻醉雖然在動物實(shí)驗(yàn)中用途不是很廣泛,但貓、犬等大動物在短時間的實(shí)驗(yàn)中可能會使用局部麻醉的方法。

注意事項(xiàng)

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在動物手術(shù)過程中,如果臟器長時間暴露,應(yīng)適當(dāng)?shù)渭訙匦缘纳睇}水,防止黏膜發(fā)干。

眼部周圍可以涂抹潤滑的眼膏,減少由于眼部干燥造成損傷。

麻醉后小鼠體溫調(diào)節(jié)機(jī)能被抑制,出現(xiàn)體溫下降。此時,常需要采取保暖措施,例如恒溫加熱毯、暖照燈等。還要注意每過10min左右翻身,防止血液沉積或肺葉的塌陷。

注意觀察小鼠的心率、呼吸頻率、眼球/尾部/耳朵的血管充盈程度等。

術(shù)后應(yīng)提供無菌的籠具和舒適飼養(yǎng)環(huán)境,若術(shù)部的牽拉會阻礙小鼠飲水,應(yīng)當(dāng)在籠內(nèi)放置無菌的果凍及輻照后的飼料供其食用。

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