熒光蛋白手冊
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將示蹤基因敲入到小鼠內源基因的或5'端或3'端,且與內源基因融合表達,可以確定內源蛋白的亞細胞定位(如圖3所示)。熒光標簽插入位置的決定因素:1. 已有文獻的報道,首先考慮已有的參考模型;2. N端或C端有無蛋白修飾,避免插入的位置進行蛋白翻譯后的修飾;3. 離主要功能域遠的N端或C端,確保蛋白正常功能的行使。總之,熒光標簽插入的位置應盡量避免影響蛋白的正常功能。01熒光蛋白的由來圖2. 熒光蛋白發展史 (A), FPs的系統發育樹(B)02熒光蛋白的分類表1. 通用熒光蛋白參數表RFPs(紅色熒光蛋白):mCherry具有優異光穩定性,是最通用紅色單體(但融合表達時有較弱的齊聚效應)
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