應(yīng)用MTT、CCK-8比色法,檢測細(xì)胞存活和生長。MTT檢測原理為活細(xì)胞內(nèi)線粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源無色的MTT形成藍色的結(jié)晶Formazan,并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的Formazan,用酶聯(lián)免疫檢測儀在一定波長處測定其吸光值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。CCK-8原理與MTT類似,其靈敏度更高,而且孵育后可以直接上機檢測,不需要DMSO溶解,操作更方便。
1.細(xì)胞接種:收到客戶細(xì)胞后,我們會用細(xì)胞計數(shù)板對細(xì)胞進行計數(shù),得出細(xì)胞懸液濃度。計算出應(yīng)稀釋的倍數(shù),按MTT或CCK-8試劑盒要求在96孔板內(nèi)接種相應(yīng)濃度的細(xì)胞懸液;
2.細(xì)胞培養(yǎng):然后在無菌恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)接種好的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,并實時觀察細(xì)胞狀態(tài);
3.藥物處理并呈色:按不同濃度梯度加入藥物作用細(xì)胞;
4.溶解、比色:加入MTT或CCK-8,按操作要求孵育相應(yīng)時間,在酶標(biāo)儀內(nèi)檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結(jié)果。(CCK-8孵育后可直接比色,MTT需要加DMSO溶解紫色晶體)