一、實驗材料
牛二型膠原(北京博蕾德技術發(fā)展有限公司,20022)
CFA (北京博蕾德技術發(fā)展有限公司,7008)
二、實驗方法
1、將牛二型膠原溶于0.05M醋酸中,終濃度2-4mg/ml,溫和攪拌,4℃過夜。
2、將牛二型膠原醋酸溶液與CFA等量混合并乳化,乳化使用高速攪拌器,冰浴攪拌CFA和膠原溶液,一般攪拌3次,30000rpm/3min。保證乳化液滴入水中成團不散開。
3、初次免疫:小鼠尾根注射0.1ml乳液。從尾根部2cm處插入針頭,針尖距離尾根0.5cm注射。
4、二次免疫:第21天,小鼠尾根再次注射0.1ml乳液。從尾根部2cm處插入針頭,針尖距離尾根0.5cm注射。
5、一般在二次免疫后7-12天,模型組小鼠80%以上會出現關節(jié)炎癥狀。根據小鼠關節(jié)紅腫程度和活動狀態(tài)進行臨床評分。在實驗前和實驗后的第3、5、7、12天分別觀察記錄。
評分標準:
得分 | 發(fā)病情況 |
0 | 正常 |
1 | 腳部皮膚發(fā)紅,無明顯腫脹 |
2 | 輕度的踝關節(jié)、腕關節(jié)發(fā)紅、腫脹 |
3 | 踝關節(jié)或腕關節(jié)中度發(fā)紅腫脹 |
4 | 腳趾及關節(jié)紅腫嚴重,強直或畸形 |