一、實驗材料
MOG35-55(吉爾生物,51716)
CFA(sigma,F5881)
百日咳素(sigma,P7208)
二、實驗方法
1、抗原乳化:1mg/ml的CFA和1mg/ml的MOG35-55混合乳化,利用三通管排出注射器中的空氣,冰上來回交替推動活塞30 min,抗原呈完全乳化狀態。
(也可使用高速攪拌器,4℃攪拌2min,3-5次)
2、完全乳化的抗原使用1 ml注射器分裝,排除內空氣后保存于冰上。
3、百日咳素(PTX)的稀釋:用1×PBS以1:25稀釋PTX至終濃度2ug/ml。
4、小鼠尾靜脈(i.v.)注射PTX,100ul/只小鼠 。
5、小鼠氣麻后,用酒精棉球消毒小鼠前肢肩胛骨與后扇部位的皮膚,皮下注射MOG35-55抗原乳化液于該四點處,每處50μl。
7、48 h后,每只小鼠再次尾靜脈注射100μl PTX。
8、模型誘導首天記為Day 0,每天統計小鼠體重,觀察評分 。
評分標準:
評分 | 臨床體征 | 具體表現 |
0 | 無臨床癥狀 | 正常步態,尾巴可以移動并抬起,如果將鼠標固定在尾巴底部, 尾巴會纏繞在圓形物體上 |
1 | 部分軟尾 | 正常步態,尾端下垂 |
2 | 癱瘓的尾巴 | 正常步態,尾巴下垂 |
3 | 后肢輕癱,運動不協調 | 步態不協調,尾巴跛行,后肢對擠壓有反應 |
4 | 一條后肢癱瘓 | 步態不協調,一條后肢拖拉,尾巴跛行,一條后肢對擠壓沒有反應 |
5 | 兩條后肢癱瘓 | 步態不協調,雙后肢拖拉,尾巴跛行,雙后肢對擠壓沒有反應 |
6 | 后肢癱瘓,前肢無力 | 步態不協調,前肢用力拉扯身體,前肢在擠壓后反射,尾巴跛行 |
7 | 后肢癱瘓,前肢癱瘓 | 老鼠不能移動,一個前肢對腳趾擠壓做出反應,尾巴跛行 |
8 | 后肢癱瘓,前肢癱瘓 | 老鼠不能移動,兩個前肢對腳趾擠壓沒有反應,尾巴跛行 |
9 | 垂死的 | 沒有動靜,呼吸遲緩 |
10 | 死亡 | |