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Cre-ERT2小鼠是一類含有雌激素受體（estrogen receptor，ER）的配體結(jié)合區(qū)突變體（ERT）與Cre重組酶的融合蛋白表達的小鼠。Cre-ERT2在無Tamoxifen誘導的情況下，在細胞質(zhì)內(nèi)處于無活性狀態(tài)；當Tamoxifen誘導后，Tamoxifen的代謝產(chǎn)物4-OHT（雌激素類似物）與ERT結(jié)合，可使Cre-ERT2進核發(fā)揮Cre重組酶活性。

Tamoxifen給藥建議如下：

1. 他莫昔芬的配置和儲存他莫昔芬不溶于水，一般建議用玉米油溶解：可按照20mg/ml的終濃度進行配置，37℃搖晃過夜。由于玉米油太多會導致他莫昔芬溶解度變差，所以建議一次配置50mL以內(nèi)的他莫昔芬溶液，配置完成后分裝成1mL每管，-20℃避光保存，使用時避免反復(fù)凍融，正常半年內(nèi)都是可以使用的。此外，他莫昔芬對光敏感，在制備和儲存過程中需要注意避光處理。

他莫昔芬和玉米油的品牌較多，我們常用的如下，僅作參考：

Tamoxifen?(Sigma‐Aldrich)：CAS # 10540-29-1?

玉米油 (Sigma‐Aldrich) CAS# 8001-30-7

2. 他莫昔芬的給藥劑量及頻次

對于成年小鼠（4周齡以上），他莫昔芬的推薦劑量為75mg/kg-120mg/kg。120mg/kg是我們現(xiàn)在使用比較普遍的一個劑量，一般注射3-5次（我們常用5次），隔天一次；75mg/kg是我們做過的最低劑量，但是給藥需要持續(xù)5次。幼鼠劑量可以降到100mg/kg。孕鼠及老齡鼠（大于6月齡）的劑量也需要適當減少。

3. 他莫昔芬的給藥方式

他莫昔芬可以通過腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥，應(yīng)用最廣泛的是腹腔注射給藥，腹腔注射的給藥劑量精準，便于控制。

腹腔注射給藥流程：正確抓取小鼠，將小鼠的鼻子朝向地面，露出腹部；定位動物的中線并將腹部分成四個象限，特別是動物的右下象限，是腹腔注射的合適位置（右下象限缺少重要的解剖結(jié)構(gòu)）；多次腹腔注射時，應(yīng)交替注射部位。

注：Tamoxifen會影響胎兒發(fā)育和生產(chǎn)，孕鼠誘導的時間盡量選擇孕晚期，并同時注射孕酮來減少流產(chǎn)概率。

灌胃給藥的給藥劑量和頻率與腹腔注射相同，在正式實驗前，建議同學們先反復(fù)練習，熟練掌握灌胃給藥的技巧。

飲食/飲水給藥使用較少，主要是他莫昔芬水溶性差，小鼠的給藥劑量不好量化，且需要的誘導時間較長（一般需要幾周進行誘導），在誘導期間往往還伴隨著小鼠體重的下降（約10-15%）。

4. 注意事項

A. 他莫昔芬注射完成后不建議立刻開展實驗，一般來講，停藥后需要繼續(xù)飼養(yǎng)7天，再安排后續(xù)實驗。

B. 對照組小鼠需要同步進行不含他莫昔芬的玉米油溶液給藥。

C. 未處理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分籠飼養(yǎng)，小鼠舐舔到他莫昔芬懸液，梳毛等行為可能導致意外敲除。

D. 加熱不會導致Tamoxifen失效，37℃過夜溶解他莫昔芬是沒有問題的。

最后，不同的實驗方案、不同的小鼠品系、不同的組織器官等對于給藥劑量、給藥頻率和給藥方式等的要求往往是不同的，因此，上述方法只是一個參考，面對具體實驗時，同學們還應(yīng)根據(jù)參考文獻、實驗經(jīng)驗先進行預(yù)實驗，以確定最佳方案。

參考文獻：Feil S, Valtcheva N, Feil R. Inducible Cre mice. Methods Mol Biol. 2009;530:343-63.  doi: 10.1007/978-1-59745-471-1_18. PMID: 19266339.