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然而，同源小鼠模型與人類癌癥的相關性逐漸受到質疑。小鼠腫瘤模型無法檢測出所有對人類惡性腫瘤具有潛在活性的化合物，小鼠的藥物代謝與藥物活性也與人類存在差異。因此，異源腫瘤移植模型應運而生。

具有維持異種移植腫瘤能力的裸鼠的發展標志著許多全球藥物測試項目的關鍵性變化。1969年，丹麥學者Rygaard首次成功地將人類結腸癌腫瘤移植于3只裸鼠體內[2]。1972年第一例通過細胞系注射構建的小鼠CDX模型誕生，與稍早建立的直接來源于患者的PDX模型相比，細胞系容易獲得，建模難度低，具有快速、高通量和可重復性等優點，更有利于抗癌藥物篩選。

1992年，NCI使用來源于9種不同類型腫瘤（腦，結腸癌，白血病，肺，黑素瘤、卵巢癌、腎癌、乳腺癌和前列腺癌） 的60位癌癥患者腫瘤細胞系，引入了一種”disease-oriented”的藥物篩選策略，簡單來說，就是先用人腫瘤細胞系進行高通量體外藥物篩選，再用CDX模型進行體內驗證，這一方法具有細胞系易獲得、有大量已發表的文獻關于其基因組學、細胞功能學及藥效反應的數據可供參考、建模成本低等優勢，在各大實驗室迅速風靡起來。

圖2. 南模生物免疫缺陷鼠的品系和異同點

南模生物擁有多種可構建CDX模型的免疫缺陷鼠，如裸鼠、NOD SCID小鼠、M-NSG鼠等，其中由我們自主研發的M-NSG是當前免疫缺陷程度最高的小鼠之一，缺失成熟T細胞、B細胞和NK細胞，非常適合作為各類CDX模型移植的宿主小鼠。

2. 細胞系選擇

在給小鼠注射腫瘤細胞之前，需要明確所選擇的腫瘤細胞確實可在所選免疫缺陷小鼠品系的體內形成腫瘤。可通過檢查現有文獻或者瀏覽細胞供應商的網站獲得細胞系致瘤性的信息，也可以在4-5只小鼠上注射不同細胞數進行預實驗，下面提供部分細胞的成瘤信息：

常規較容易成瘤的細胞：

Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460（大細胞肺癌）， A431（表皮癌），SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7，SKBR3（乳腺癌）， A375/B16-F10（人黑色素瘤細胞），SGC7901（人胃腫瘤細胞），KB（人口腔表皮樣癌細胞）

可以成瘤但是比較慢的細胞：

CNE（鼻咽癌），A549（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29（結腸癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231（乳腺癌），SH-SY5Y（人神經母細胞瘤細胞 ） ， U251（人膠質瘤細胞） ， BGC-823（人胃癌細胞） ，PC-3 （人前列腺癌細胞）

圖3. 支原體

接種細胞一般選擇在對數生長期的細胞，細胞密度為80-90%左右為宜。收集細胞前一晚須換新鮮培養基確保細胞狀態良好。接種時所用細胞懸液須不含血清。一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/只，接種體積為0.1-0.2mL。如有需要，可以加入基質膠加速瘤塊的生成，基質膠和無血清培養基（或PBS）的比例為1：1。

南模生物擁有數百種人源細胞系，覆蓋大部分癌種，滿足客戶的各類移植需求。此外，南模生物還擁有成熟的基因編輯技術，可提供人源細胞系定制服務。

3. 接種部位

根據我們構建的腫瘤模型類型的不同，接種部位可以分為三大類：皮下接種、原位接種、靜脈接種。原位接種的部位為細胞系對應癌種所在部位，靜脈接種一般選擇尾靜脈、左心室注射。皮下注射有五個主要的皮下部位：側腹、下背部、上背部（肩胛骨之間）、后腿和乳腺脂肪墊（第四腹股溝乳頭下方）。

圖4. 小鼠皮下接種常用位置[4]

構建CDX模型的目的不同直接影響著接種部位的選擇。一般來說，用于研究生物標志物或藥物治療構建的腫瘤模型，首選部位為側腹或者下背部，這些區域生長的腫瘤易于觀察和測量，并且無需鎮靜或麻醉小鼠。接種在上背部（肩胛骨之間）的腫瘤有助于成像研究，例如正電子發射斷層掃描，腫瘤生長的區域遠離非腫瘤組織可以更好的避免非腫瘤組織積累放射性核素并掩蓋腫瘤信號的情況。接種于后腿通常用于涉及外部射線照射的研究。軀干/身體和對輻射敏感的器官可以由鉛屏蔽保護，只有腿（承載腫瘤）在屏蔽外，暴露在輻射中。乳腺脂肪墊的使用通常限于研究乳腺腫瘤的生長、轉移和藥物治療。

皮下接種的細胞一般會在接種后1-2周左右可見皮下開始出現腫塊，尾靜脈和腹腔接種的細胞一般也是1周左右成瘤。根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過2000mm3。

圖5. 將腫瘤測量值轉換為腫瘤體積

如果細胞接種后超過預期時間仍未成瘤，需排查以下原因：

· 細胞活力：細胞活力是影響腫瘤形成的重要原因，接種細胞前須觀察細胞狀態，細胞消化后需用PBS清洗并盡快接種（盡量在半小時內完成）。

· 動物選擇：選擇小鼠周齡不宜過大（一般在4-6周齡，體重16-18g左右）。若裸鼠無法成瘤，建議使用免疫缺陷程度更高的小鼠，如NOD SCID小鼠、M-NSG小鼠。

· 飼養環境：小鼠生活環境較差會影響小鼠狀態，造成小鼠死亡。

南模生物不僅可以提供各類免疫缺陷小鼠和數百種人源細胞系，同時具有豐富的CDX模型（包括皮下成瘤模型、原位移植模型和轉移瘤模型）構建經驗，部分案例如下：

在研究階段，CDX模型作為最便捷的腫瘤研究體內模型之一，常用于腫瘤的生物標志物篩選、組織病理學、腫瘤轉移以及血液學分析等研究。

作為腫瘤藥物研發過程中的黃金標準模型，CDX模型以及時且經濟高效的方式，提供了推動治療藥物發展及促進臨床前開發項目所需的關鍵決策信息。

南模生物可以為您的藥物選擇合適的CDX模型，并提供多種藥理藥效分析服務，部分數據如下：

人類免疫系統與腫瘤微環境（TME）的平衡對于腫瘤治療也至關重要，目前，靶向免疫系統的藥物同樣占據了很大的腫瘤藥物市場。普通的CDX模型無法很好的模擬人類免疫系統和腫瘤之間的相互作用，因此越來越多的人選擇構建免疫系統人源化的CDX模型。

南模生物可通過移植人源外周血細胞、造血干細胞等，實現在小鼠體內重塑人源免疫系統。利用huPBMC-M-NSG或huHSC-M-NSG小鼠構建的腫瘤模型可滿足腫瘤免疫學和相關藥效評估的需求。部分驗證數據如下：

利用huPBMC-M-NSG模型進行藥效評價

圖11. 利用骨髓瘤（H929）hu-PBMC模型進行體內藥效研究

利用hu-HSC模型進行藥效評價

圖12. 利用乳腺癌（MDA-MB-231）hu-PBMC模型進行體內藥效研究

經過幾十年的發展，CDX模型目前還是癌癥研究以及抗癌藥物篩選的主要工具之一。但CDX模型存在著無法保留腫瘤的異質性、腫瘤細胞生物學行為及基因譜表達水平均與原始腫瘤組織存在較大差異等問題。PDX模型由于其穩定保留腫瘤異質性、藥物試驗結果具有較好臨床預見性等優點，也逐漸引起研究者的重視，但PDX也存在著建模難度高且不能反復獲取、構建時間長且成功率不穩定、傳代次數有限等問題。總的來說，不同的動物模型為研究多種腫瘤的的生物學特性提供了一個相互補充的系統，我們可以根據自身需求進行選擇。