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　　采血，是除了給藥以外的另一個必備動物實驗技能。根據采血的部位不同，大小鼠采血大致可以分為以下幾種方式：尾尖采血、眼眶靜脈叢采血、頜下靜脈采血、隱靜脈采血、心臟采血等。本期，小編就給大家系統性的盤點下大小鼠采血的相關知識。首先，我們來看看在動手采血之前需要了解的tips?

　　單次采血量，采血間隔

　　小鼠的循環血量大約是72ml/kg。以25g的成年小鼠為例，它的循環血量大約為1.8ml。大鼠的循環血量大約是64ml/kg。以250g的成年大鼠為例，它的循環血量大約為16ml。

　　表1. 大小鼠的循環血量

　　采集10%的循環血量之后，大約需要2周時間恢復。

　　狀況良好的小鼠一般采血量建議不超過循環血量的10%。有研究表明失血超過15%以上實驗動物會發生血量減少性休克。以25g的成年小鼠為例，10%的循環血量大約是0.2ml。

　　表2. 大小鼠建議最大采血量

　　采血之后，小鼠需要一段時間的恢復，其血液指標才會恢復到正常水平。下面的表格列出了不同采血量對應的恢復期：

　　表3. 大小鼠采血量及恢復期

　　如果需要多點采血，每周最大采血量最好不超過循環血量的7.5%;每兩周最大采血量不超過循環血量的10%。

　　尾尖采血

　　· 麻醉小鼠后，用溫水擦拭尾巴，引起輕微的血管擴張。但水溫不要過高。

　　· 用無菌手術刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截斷小鼠尾尖0.5-1cm。如果需要多次采血，之后每次僅需截除2-3mm。

　　· 可以從尾部向尾尖方向按摩，以增加血流。但是，這會降低血樣的質量，增加溶血的風險。

　　· 可以用毛細采血管收集血液，或直接滴入收集管中。

　　· 采血結束后，按壓傷口或使用止血劑(如硝酸銀)來止血。

　　· 每次采血量大約可達0.1ml。

　　應用：適用于所需血量少的連續多次采血，如血糖或血常規的動態檢測。

　　眼眶靜脈叢采血

　　· 小鼠經氣體麻醉后，左手拇指及食指壓迫小鼠的頸部兩側，使眼球突出，眼眶后靜脈叢充血。也可以將小鼠放置在側臥位，拇指與食指分別置于小鼠頭頂和下頜，將皮膚向后及向下拉。

　　· 抓握時要避免對氣管施壓，否則可能會影響小鼠呼吸。

　　· 將毛細采血管置于內側眼角處，并且以與鼻翼平面成30-45度刺入。

　　· 在輕輕旋轉采血管的同時施加壓力。血液將通過毛細作用流入采血管。

　　· 不能刺地過深，一般2-3mm即可。

　　· 采血結束后，立即松開手指對小鼠的壓迫，使眼球復位，同時將采血器拔出。

　　· 可用干棉球壓住眼眶，確保止血。

　　· 一般眼眶靜脈叢采血量可以達到0.2-0.3ml。

　　應用：適用于需中等量的血液、避免小鼠死亡的血液指標的連續監測。

　　頜下靜脈采血

　　· 保定小鼠，可將小鼠側臥，使小鼠頭部盡量固定。

　　· 在小鼠嘴角沿線與外眼角線橡膠處找到頜下靜脈的大致位置，會發現一個無毛的小點，有點像酒窩?；疚挥谧旖沁h端稍低于下巴線。

　　· 針保持垂直于皮膚表面，刺入皮膚。深度不超過針頭的斜面。

　　· 拔出針頭后，血液就會流出。為方便采血，可使小鼠頭部低于心臟高度。

　　· 可以直接使血液滴入采集管，也可以使用毛細采血管。

　　· 采血結束后，按壓以止血。

　　· 一般采血量為0.2-0.5ml。

　　應用：小量反復采血，無需麻醉，適用于所需血量少的連續多次采血。

　　隱靜脈采血

　　· 將小鼠置于固定管或架中，但保持后腿可自由活動，剃除跗部的毛。

　　· 為使膝蓋與踝關節之間的隱靜脈更加明顯，可以在后腿膝蓋以上使用止血帶。在近尾側的皮膚表面可以找到隱靜脈。

　　· 針垂直于皮膚表面扎破血管。不要進針過深，以免刺穿肌肉或碰到骨頭。

　　· 血液會從入針處慢慢流出，用毛細采血管收集，并松開止血帶。

　　· 采血結束后，按壓傷口或使用止血劑(如硝酸銀)以止血，并將小鼠放回籠內。

　　應用：小量反復采血，無需麻醉，適用于所需血量少的連續多次采血。

　　心臟采血

　　一般有3種心臟采血的姿勢：

　　1、托起小鼠軀干使身體垂直與地面。身體直立以防止心臟的偏轉或胸部的扭曲。使用1毫升注射器和22g針頭。將針頭從胸部中央向下5mm處插入，深度5-10mm，將注射器與胸部保持25-30度。

　　2、使小鼠仰臥，通過胸骨垂直插入針頭。

　　3、使小鼠側臥，垂直于胸壁插入針頭。

　　· 如果血液沒有立刻進入注射器，可以輕輕抽空針管，產生一個真空區。

　　· 當注射器中出現血液時，將針管保持靜止并輕輕地抽拉活塞芯桿，以獲得更多地血液。

　　· 一般可以采到0.8-1.0ml血液。

　　應用：適用于需血量大的實驗終末期的動物采血，常用于血常規、免疫、生化指標的檢測。

　　這些采血方式應該怎么選擇呢?

　　我們再來總結一下它們各自有什么特點。

　　表4.不同采血方式的特點概況

　　看完了方法，別忘了要練習哦!

　　參考文獻

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　　2、Diehl K. H. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J.Appl.Toxicol.21.15-23(2001).

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