目的 觀察和分析斑馬魚體腎的微細結構,并對其分泌的外泌體進行分離鑒定。
方法 應用光學顯微鏡和 電子顯微鏡技術系統觀察斑馬魚體腎的顯微結構和超微結構,用納米顆粒跟蹤分析 (nanoparticle tracking analysis,NTA) 技術檢測外泌體粒徑大小。
結果 斑馬魚體腎緊貼并平行于脊椎,腎單位由腎小管和腎小體組成, 其中腎小管可細分為近曲小管、遠曲小管及頸段 3 種類型,腎小體由腎小球和腎小囊構成;經高碘酸-希夫 (periodic acid-Schiff,PAS) 染色后,可見近曲小管富含糖原顆粒,其游離面有明顯的刷狀緣結構。透射電子顯微 鏡下,在腎小管的管腔觀察到外泌體分布,上皮細胞游離面的胞質有少量多囊泡體和大量的晚期內涵體分布,腎小 管的頂端和腎小球足細胞中亦觀察到少量多囊泡體分布。通過CD9、CD63和TSG101免疫組織化學和免疫熒光檢測 顯示,多囊泡體及其外泌體在腎小管管腔的游離面高表達,在腎小體和管腔內表達較弱。NTA和透射電子顯微鏡觀 察結果顯示,分離獲得的斑馬魚體腎外泌體呈茶托狀,粒徑眾數為144.4 nm,符合外泌體形態和直徑大小特征。
結論 斑馬魚體腎具有哺乳動物腎臟的典型結構,為體內的泌尿器官。腎小管具有分泌外泌體的能力,其形成是多囊 泡體向細胞游離面釋放到胞外的過程。本研究結果為水生實驗動物泌尿器官的功能研究及相關模型的開發應用奠定 了形態學基礎。
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